實時熒光定量PCR標(biāo)準(zhǔn)品稀釋法

實時熒光定量PCR是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料，利用熒光信號積累對PCR反應(yīng)的過程，進(jìn)行實時監(jiān)控實現(xiàn)起始模板的準(zhǔn)確定量。實時熒光定量PCR標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋方法依次是選擇目標(biāo)、提取/PCR、純化、測試濃度、調(diào)整濃度、梯度稀釋。一般CT值在18-30之間，覆蓋全部樣品濃度區(qū)間。和大家在分享一下10倍連續(xù)梯度稀釋方法：1V原液（標(biāo)準(zhǔn)品為i）+9V稀釋緩沖液，得到標(biāo)準(zhǔn)品為ii。1V標(biāo)準(zhǔn)品ii+9V稀釋緩沖液，得到標(biāo)準(zhǔn)品為iii, 1V標(biāo)準(zhǔn)品iii+9V稀釋緩沖液，得到標(biāo)準(zhǔn)品為iv, 1V標(biāo)準(zhǔn)品iv+9V稀釋緩沖液v,切不可用標(biāo)準(zhǔn)品i分別加不同體積的稀釋緩沖液直接得到標(biāo)準(zhǔn)品ii、iii、iv、v，標(biāo)準(zhǔn)品要復(fù)管做測試，復(fù)管次數(shù)要遵循統(tǒng)計學(xué)要求。熒光PCR凍干時，制品溶液厚度不宜過厚。一般應(yīng)為10-15mm，制品過厚的情形類似于濃度過高時的情況，不僅干燥的時間更長，塌陷、結(jié)塊。凍干機(jī)Pilot3-6T醫(yī)療應(yīng)用涉及產(chǎn)品有：熒光PCR、免疫微球、化學(xué)發(fā)光、基因芯片、量子點(diǎn)、ELISA、膠體金、POCT、IVD校準(zhǔn)品質(zhì)控品校準(zhǔn)品、內(nèi)毒素檢測試劑、血清、白蛋白、干細(xì)胞及相應(yīng)提取物等。