實(shí)時(shí)熒光定量PCR的方法

實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的方法有實(shí)時(shí)熒光PCR一步法與實(shí)時(shí)熒光PCR兩步法。一步法與兩步法有什么區(qū)別呢？一步法為反轉(zhuǎn)錄和PCR擴(kuò)增在同一個(gè)管內(nèi)完成。兩步法為反轉(zhuǎn)錄和PCR擴(kuò)增分兩步進(jìn)行，先從RAN模板反轉(zhuǎn)錄得到cDNA，得到的cDNA在進(jìn)行一次或多次不同的PCR反應(yīng)。一步法與兩步法有那些優(yōu)點(diǎn)呢？一步法: 快速, 簡(jiǎn)便, 敏感, 減少污染機(jī)會(huì), 減少了RNA 二級(jí)結(jié)構(gòu), 聚合酶具有校正活性, 減少PCR 反應(yīng)的錯(cuò)配率。兩步法: 同一管中同時(shí)擴(kuò)增兩個(gè)引物, 減少了一些人為的誤差; 將RNA 轉(zhuǎn)錄為cDNA, 易于保存，把反轉(zhuǎn)錄體系分開(kāi)做，一次的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物可以多次用來(lái)做PCR，非常適用于摸索PCR條件。;兩步法整個(gè)過(guò)程比一步法的費(fèi)用少。一步法和兩步法各有其特點(diǎn)，要按照試驗(yàn)的對(duì)象具體確定用那一種方法，對(duì)不適合于提取mRNA的樣品只能用一步法RT-PCR方法。熒光PCR凍干設(shè)備技術(shù)要點(diǎn)：1.無(wú)外界干擾熱量。2.內(nèi)部溫度均一。3.極限真空度好。4.設(shè)備過(guò)程控制能力強(qiáng)。試劑凍干機(jī)Pilot5-8T涉及產(chǎn)品有熒光PCR、免疫微球、化學(xué)發(fā)光、基因芯片、量子點(diǎn)、ELISA、膠體金、POCT、IVD校準(zhǔn)品質(zhì)控品校準(zhǔn)品、內(nèi)毒素檢測(cè)試劑、血清、白蛋白、干細(xì)胞及相應(yīng)提取物等。